水解氫促進傷口癒合，加速修復！
傷口護理策略儘管在醫療方面取得了進展，但目前尚無促進自體組織修復能力的治療方法。已經證明水解氫能有效保護細胞和組織免受氧化和炎症損傷。儘管水解氫的全面作用及其在傷口癒合中的功能尚不明確，尤其是水解氫與細胞外基質（ECM）沉積和表皮幹細胞（EpSCs）激活之間的關聯。
我們建立了一個皮膚無菌傷口模型，並在治療室中應用了高濃度的水解氫（66％H2）。通過基因功能豐富度分析、數字空間分析器分析、血流灌注/氧檢測試驗、體外管形成試驗、酶聯免疫吸附試驗、免疫螢光染色、非靶向代謝組分析、流式細胞儀、透射電子顯微鏡和活細胞成像來評估分子機制和癒合效果。
結果我們發現高濃度的水解氫（66％H2）極大地增加了創傷後第11天的癒合速度（比對照組高出3倍）。該效果不依賴於O2或抗反應性氧氣功能。組織學和細胞實驗證明了H2組中的快速再上皮化。發現了H2組近端傷口的早期（創傷後3天）ECM成分沉積，特別是皮膚表皮下I型膠原、表皮下III型膠原和真皮-表皮連接處的XVII型膠原。水解氫加速了早期自體表皮幹細胞的增殖（提前1-2天），然後分化為肌上皮細胞。這些表皮肌上皮細胞可以進一步促進ECM沉積。其他有益的結果包括持續濕潤癒合、更多的血管生成、較少的T幫助器1和T幫助器17細胞相關的全身性炎症，以及更好的組織重塑。
我們發現了一種由分子氫治療誘導的新型傷口癒合模式。這是首次揭示了水解氫與ECM沉積和EpSCs激活之間的直接聯繫。這些水解氫誘導的多重優勢在癒合中可能與各種細胞的細胞活力增強以及在生命的生物過程中維持基本水平的線粒體功能有關，也證實了水解氫促進傷口癒合的能力！
成年哺乳動物的傷口癒合通常涉及四個主要過程[1,2,3,4]：止血、炎症、增生和重塑，這些過程可能會留下疤痕[5,6]。在這些階段的任何失敗都可能導致急性或慢性傷口修復障礙[7]。在評估傷口癒合時，縮寫“TIME”（組織、感染/炎症、濕度平衡和傷口邊緣）已被用來描述有利的傷口基底微環境[8,9]。在動態癒合過程中，快速的再上皮化是由表皮幹細胞（EpSCs）和細胞外基質（ECM）介導的，以恢復皮膚屏障[10,11,12]。 EpSCs可以從各種組織中被激活和招募[13]，例如毛囊（HFs）、毛囊間表皮（IFE）和骨髓[14,15,16,17]，從而補充創傷部位的角質細胞並促進傷口愈合[18,19]。此外，ECM分子可以刺激角質細胞從傷口邊緣和附近組織遷移至傷口基底[20,21]。除了作為支架[22]外，ECM對於創傷皮膚祖細胞的環境創造至關重要[23]。這主要是由於ECM中的膠原蛋白[24]，它由成纖維細胞、上皮細胞[25]和角質細胞[12]合成，並構成轉化性傷口修復藥物和療法的基礎[26,27,28,29]。然而，癒合過程是多方面的，需要改進傷口癒合，包括更安全和更有效的傷口癒合方法。
傷口癒合過程涉及各種具有不同作用的細胞類型在所有階段的時空同步[30]。在這些過程中，反應性氧氣（ROS）梯度被認為是激活細胞反應的第一個信號之一，並且對於調節癒合過程的其他幾個階段至關重要[31]。促進傷口癒合的關鍵因素還包括避免由ROS過量產生引起的組織損傷，並激活組織修復功能。
氫氣已被Ohsawa等人[32]於2007年報導是一種有效的抗氧化劑，可以保護大鼠腦部免受缺血再灌注損傷。其他研究增加了H2療法對於大量氧化損傷和炎症性疾病的證據[33,34,35,36]。最新的研究表明，氫在皮膚損傷方面也可能有益，例如，已經顯示H2能夠有效改善皮膚創傷[37]、燒傷傷口[38]、壓瘡[39,40]、糖尿病性傷口[41,42]、放射性損傷[43]、牛皮癬損傷[44]和口腔傷口[45]的損傷修復。目前對氫促進傷口癒合的解釋主要集中在其抗炎、抗氧化應激和與細胞毒性ROS反應的能力上。少量研究表明，H2可能對幹細胞的存活和膠原合成起作用。Kawasaki等人[46]建議氫氣延長了髓鞘細胞的體外複製壽命，而Zhang等人[47]指出氫氣通過減少羥基自由基保護造血幹細胞免受輻射損傷。在壓瘡的一項研究中，使用馬爾神經元染色證明了氫氣吸入誘導了膠原蛋白合成[40]，在另一項糖尿病傷口的研究中，H2的局部應用被揭示可以誘導Col-1[42]。對氫在傷口癒合中進行更全面和深入的研究仍然是必要的，仍然有許多問題需要回答，例如H2如何對不同類型的細胞，尤其是幹細胞活性起作用？在H2治療下合成了哪些類型的膠原蛋白和其他ECM？這種氫促進的傷口癒合是否劑量依賴？
在本研究中，通過使用全層背部皮膚缺陷小鼠模型，我們揭示了在高濃度H2（66％H2 + 33％O2）室中每日治療可以誘導一種新型的傷口癒合模式，其中炎症更少，血管生成更好，細胞遷移更快，線粒體功能維持較好，痂皮形成較少。H2治療促進了早期ECM沉積和EpSCs激活，從而提供了一種簡單有效的方法來改善傷口癒合（主要是由於高濃度的H2）。H2釋放敷料在皮膚傷口癒合中獲得了相應的效果。因此，H2治療可能提供一種與傳統傷口護理模式不同的新策略，可在臨床手術後治療中廣泛應用。
細胞培養 人胚胎皮膚成纖維母細胞CCC-ESF-1（ESF）（第10代，G10）、人胚胎肺成纖維母細胞CCC-HPF-1（HPF）（G10）、人免疫角質細胞系（HaCaT）（G8）和人臍靜脈內皮細胞（HUVECs）（G3）均來自中國北京的國家細胞系資源中心。新生嬰兒臍帶中提取的原代間質幹細胞（人臍帶原代間質幹細胞（HUCP-MSCs））由北京市婦產科醫院捐贈。細胞通常在DMEM培養基（對於ESF、HPF、HaCaT和HUVEC）（Gibco，美國紐約）中培養，在其中添加了10%胎牛血清（Gibco，美國紐約）和1%青霉素和鏈黴素（Gibco，美國紐約），並在5% CO2和37°C下培養。
動物實驗 所有動物研究均根據中國人民解放軍總醫院第六醫學中心生物醫學研究倫理委員會批准的方案進行，所有程序均按照《實驗動物管理辦法》（中國）執行。雄性C57BL/6J小鼠（7周齡，20-24克）由北京生命力河實驗動物技術有限公司購買。動物在22°C至25°C的標準條件下飼養，每天12小時的光/暗週期，並且餵食普通飲食。口服氟苯尼考汀（0.17毫克/毫升）以每日飲用水形式給予，該抗生素是用無氯和無酸的水配製而成。對於NAC治療組，對每隻體重為22（±2）克的小鼠注射3.3毫克NAC（ROS清除劑乙酰半胱氨酸；＃S1623，Selleckchem，中國）在260微升蒸餾水中溶解。
持續高濃度的H2顯著加速了皮膚傷口癒合、血流灌注和血管形成。A 左：H2室系統中每個模塊之間的連接。中：小鼠背部全層皮膚傷口模型；內圈=原始傷口，外圈=取樣邊界。右：受傷後傷口剖面圖。B 動物實驗時間表和每日H2治療（或其他條件）的時間軸。小鼠進行手術30分鐘後立即放入H2室1小時。此後，每隔24小時進行1小時的H2治療（或其他條件），直至犧牲。C 在不同持續條件下（每組n = 5）塑模後每兩天捕獲傷口面積。D 塑模後（持續每日治療）傷口閉合百分比比較。E H＆E染色和Masson染色顯示創傷後第11天的組織重塑（持續每日治療）。F僅在前3天進行治療，然後在塑模後每2天捕獲傷口區域圖像（第0-9天）。G 在五個組中比較塑模後的傷口閉合百分比（在前3天進行治療）。H 創傷後0-11天在66％H2、5％H2和對照組的血流灌注。I 在三組中傷口區域的血流灌注、SO2、tHb和HHb的定量。J、K創傷後第11天真皮傷口中CD31+（綠色）管形成的代表性免疫螢光圖像和定量。L、M創傷後第3天創傷邊緣管形成的全景掃描和定量（L，距離傷口位0-1 mm），（M，距離傷口位1-2 mm）和（D，距離傷口位2-3 mm）區域。黃色虛線表示表皮與真皮之間的邊界。N、O不同處理後人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）體外血管形成的代表性顯微圖像和定量。紅色虛線標示了新形成管道的輪廓。P GSEA前5個與管形成相關的GO-bp豐富度圖顯示了H2加速管形成（比控制組提前2天）。D、G和I中的數據通過雙向ANOVA檢驗分析，K、M和O中的數據進行未配對t檢驗處理。所有數據均以Mean ± SEM繪製。P值<0.05；**P值<0.01；**P值<0.001；P值>0.05無星號；在D中的表示66％H2和對照組之間的顯著差異，5％H2和對照組分別之間的顯著差異；在G中的表示66％H2和對照組之間的顯著差異。比例尺= 100 μm。E中的黑色虛線表示表皮與真皮之間的邊界。A（右）中的箭頭表示上皮舌；E中的黑色箭頭表示創傷的真皮層中的血管。b，基底層；d，真皮；he，肥厚的表皮創傷邊緣；hf，毛囊；ife，毛囊間表皮；s，痂；sm，平滑肌；wb，傷口床
全層皮膚切口傷口癒合模型 根據Wound Healing Murine Model [48] 的一些修改建立了全層皮膚切口傷口癒合模型（圖1A）。簡而言之，使用三溴乙醇（20毫克/毫升，每隻小鼠10微升注射）麻醉小鼠，剃除毛髮並用70%乙醇清潔。我們用醫用矽膠膜的一個圈劃分了背部皮膚（以防止小鼠皮膚鬆弛導致傷口閉合），然後用醫用線縫合並使用無菌剪刀切除中心皮膚，以創建10毫米的全層切除性背部皮膚傷口。使用ImageJ軟件計算傷口面積，並計算傷口閉合百分比如下：
肌肉挫傷模型
我們開發了參考文獻[49]中所述的肌肉挫傷模型，以探索氫氣在肌肉損傷修復中的作用。使用6-8周齡的雄性C57 / BJ小鼠。詳細方法是將25-g的重量從60釐米的高度下降到腓腸肌的內表面（圖S9A）。這種建模方法強度適中，不會造成骨骼損傷或步態異常。
H2腔體處理
將一個透明的封閉盒子（20 cm × 18 cm × 15 cm）連接到氫氣發生器產生 66% 的 H2和 33% O2（V/V），5% H2（V/V）與空氣混合，或33%O2（V/V）與空氣混合。在小鼠皮膚傷口癒合建立后立即給予氫氣治療，然後每天給予氫氣治療直至實驗結束。每天將動物置於混合空氣的盒子中1小時。在這個吸入期間，小鼠是清醒的，可以自由移動。使用熱痕量GC超氣相色譜法（Thermo Fisher，MA，USA）監測密閉箱內氫氣濃度。
H2富培養基製備
H2富介質是通過使用與H相同的氫氣發生器注入氣體來生產的2腔室處理進入DMEM培養基（Gibco）中30分鐘，用針頭H檢測溶解在反應溶液中的氫氣2感測器。測量 H2在反應系統中，感測器入液體表面以下。
血液灌注和血氧檢測
根據製造商的說明，使用moorFLPI-2（Moor Instruments Limited，UK）檢測癒合過程中傷口部位的血液灌注。從影片中進一步選擇圖像，並通過moorFLPIReview V50軟體（Moor Instruments Limited，英國）進行分析。根據說明，通過moorVMS-OXY組織氧監測儀（Moor Instruments Limited，UK）測試血氧水準。選擇傷口區域的五個部位（頂部、底部、左側、右側和中部），並計算平均值以創建氧動力學曲線。
體外試管形成測定
如所述進行試管形成測定[50]。首先，將基質膠在4°C下解凍過夜，以避免氣泡形成。簡而言之，將15孔μ載玻片（ibidi，Germany）包被10μl基質凝膠，使其在37°C下固化。 收穫第10代之前的HUVEC，並在接種前通過台盼藍染色確定細胞數和活力。在DMEM中製備細胞懸液，並將15,000個細胞/孔接種在基質凝膠頂部的50μl培養基中。將HUVEC接種在條件培養基中6小時，並在倒置顯微鏡下計數和拍攝封閉的完整管網路。測量並計算每個孔的細胞的管狀環。
數字空間剖析儀和批量RNA-seq分析
Bulk RNA-seq 由 Anoroad Inc.（中國北京）處理，Digital Spatial Profiler 測定由 Capital Bio Technology Inc.（中國北京）進行。
免疫組化 （IHC） 和免疫螢光 （IF）
組織免疫染色
收穫傷口部位的皮膚組織，用福馬林固定並包埋在石蠟塊中，然後將4μm厚的石蠟切片鑲嵌在載玻片上進行組織學染色。如前所述，對石蠟包埋的組織切片進行IHC和IF[51]。簡而言之，將切片脫蠟並再水化，隨後浸入二甲苯、乙醇（100%、95%、70% 和 50%）和去離子 H 中2O.然後在檸檬酸鹽緩衝液中檢索抗原，並通過在PBS中的1%山羊血清中在室溫下孵育60分鐘來阻斷一抗（表S1A）與組織之間的非特異性染色。將切片與表S8A中列出的一抗在37°C下孵育60分鐘（IHC）或4°C孵育過夜（IF）。根據製造商的說明，用IHC或IF的特異性二抗（表S1B）進行進一步標記。對於IF，用NucBlue活細胞染色劑（R37605，Invitrogen）對細胞核進行染色。IHC 工藝中使用的 DAB、蘇木精和中性香脂封片劑購自 ZSGB-BIO（中國北京）。
細胞免疫螢光染色
將 10,000 個細胞/孔的 96 孔板中的細胞懸浮液粘附 24 小時，然後切換到全培養基。在孵育時間結束時立即用1×PBS洗滌含有接種細胞的孔，並固定在4%多聚甲醛中30分鐘。固定后，用0.3%PBS-吐溫透化細胞15分鐘，洗滌，然後在室溫下用正常綿羊血清封閉緩衝液（ZSGB-BIO，中國）封閉至少1小時。將一抗（表S1A）加入製造商推薦的稀釋度，並在4°C下孵育過夜。 使用適當的螢光染料標記的二抗（表S1B），並用NucBlue活細胞染色劑（R37605，Invitrogen）對細胞核進行染色。
蘇木精和伊紅以及馬森三色染色
Fischer等人描述的方案用於蘇木精和伊紅（H&E）染色[52]，而Masson三色染色嚴格按照製造商的方案（Masson Stain Kit（60532ES58），Yeasen，China）進行。
流式細胞術染色
用於分析 Th1，Th的2、T註冊和 Th17細胞，在受傷后24 h從小鼠的脾臟中製備單細胞懸浮液。用 CD8-APC、CD4-FITC 和 CD3-PECy5 標記細胞。對於 T-bet 和 GATA-3，將蛋白質量歸一化，並使用 APC 偶聯的抗 CD4 進行細胞表面染色，然後用 1× 固定/透化緩衝液固定，並在 1× 透化緩衝液中使用 PE 偶聯的抗 T-bet 和 APC 偶聯的抗 GATA-3 進行細胞內染色。在 1× 透化緩衝液中洗滌細胞，並通過流式細胞術（B53009，CytoFLEX 流式細胞儀，Biotek）進行分析。
用於分析T註冊細胞，使用FITC偶聯的抗CD4、PE偶聯的抗CD25、PB450偶聯的抗CD127和適當的同型對照進行細胞表面染色。將細胞與抗體在室溫下在黑暗中孵育 20 分鐘，然後在磷酸鹽緩衝溶液 （PBS） 中洗滌並通過流式細胞術進行分析。用於分析 Th17細胞，用FITC抗CD4染色細胞進行CD4表面表達，用APC偶聯的抗IL-17染色檢測細胞內細胞因數IL-17。最後，通過流式細胞術分析細胞。所有抗體和試劑均購自美國Biolegend Inc.（表S1）。
為了鑒定間充質幹細胞，應用了8種靶向細胞表面標誌物的偶聯抗體（CD73-PE、CD90-FITC、CD105-Cy5、CD34-FITC、CD45-Cy5、CD79a-PE、CD14-APC和HLA-DR-APC-Cy7）[53]，染色和檢測方法與前述方法一致。
酶聯免疫吸附測定
從全血中小心收集鼠血清，並儲存在-80°C。 處死後收穫傷口邊緣組織，在蒸餾PBS中洗滌兩次，並在含有蛋白酶抑製劑和0.1mM PMSF（Sangon Biotech，上海，中國）的裂解緩衝液中切成小塊，然後勻漿和離心（12,000rpm，20分鐘）。然後收集上清液，使用小鼠ELISA試劑盒（中國江蘇梅棉工業）進一步評估EGF（MM-0043M）、bFGF（MM-0050M1）、PDGF（MM-0070M1）和TGF-β1（MM-0921M）水準。使用 Bio-plex pro 對組織和血清樣本進行多種細胞因數檢測TM系列小鼠細胞因數 Th17 Panel A 6-Plex 試劑盒（#M6000007NY，Bio Rad，美國）。對於組織檢測，將靶生長因數的量歸一化為整個蛋白質的總量。
非靶向代謝組學分析
非靶向代謝組學分析由位於中國北京的IGENECODE公司進行。Thermo Scientific™ Dionex™ UltiMate™ 3000 快速分離液相色譜 （RSLC） 系統。使用反相C18或親水作用液相色譜柱實現UHPLC分離。對於C18分離，流動相A為乙腈/水（60/40），流動相B為異丙醇/乙腈（90/10）;A和B均含有0.1%的甲酸和10 mmol/L的醋酸銨。反相C18分離的梯度條件如表S2所示。HSS T3色譜柱（2.1×100 mm，1.8 μm，水）在45 °C下運行。 流速為300 μL/min，進樣體積為1 μL。
HILIC分離時，流動相A為乙腈，流動相B為水;A和B均含有0.1%的甲酸和10 mmol/L的醋酸銨。BEH醯胺色譜柱（2.1×100 mm，1.7 μm，水）在40 °C下運行。 流速為300 μL/min，進樣體積為1 μL（見表S3）。
採用配備 HESI-II 探頭的 Thermo Scientific™ Q Exactive™ 混合四極桿 Orbitrap 質譜儀。POS HESI-II噴霧電壓為3.7 kV，加熱毛細管溫度為320 °C，護套氣體壓力為30 psi，輔助氣體設置為10 psi，加熱汽化器溫度為300 °C。 護套氣體和輔助氣體均為氮氣。碰撞氣體也是氮氣，壓力為1.5 mTorr。全質量掃描的參數如下：解析度為70,000，自動增益控制目標低於1×106，最大隔離時間為 50 ms，m/z 範圍為 50–1500。LC-MS系統使用Xcalibur 2.2 SP1.48軟體（Thermo Fisher Scientific）進行控制，並使用相同的軟體收集和處理數據。
使用Progenesis QI數據分析軟體（Nonlinear Dynamics，Newcastle，UK）處理從兩個系統中的四種檢測中獲得的所有pos和負離子模式的數據，用於插補原始數據，峰比對，拾取和歸一化，以產生保留時間（tR）和m/z數據對的峰強度。C18的自動峰拾取範圍分別為1-16 min和1-12 min;對每個「特徵」（m/z、tR）的加合物離子進行去卷積，並在人類代謝組資料庫（HMDB）和脂質圖譜中鑒定這些特徵。
通過活細胞成像系統進行成纖維細胞運動和遷移以及角質形成細胞上皮化能力測試
將 HPF 細胞以 5000 個細胞/孔接種在底部透明的 96 孔板中，用肌動蛋白-GFP（C10506，CellLingt，Invitrogen，USA）染色並再培養 24 小時以觀察運動。以20,000個細胞/孔接種ESF細胞，用Cytation 5（Biotek）的高通量刮擦器刮擦，然後再觀察24小時以確定條件培養基的成纖維細胞遷移功能。使用 Cytation 5 細胞成像多模式讀數儀 （Biotek） 掃描細胞移動和遷移，並根據製造商的說明自動定量遷移。將HaCaT細胞接種在30,000個細胞/孔中，然後再培養24小時以觀察和計算集落形成面積（上皮化）。每個小場中的圖像每小時以 3 × 3 個蒙太奇幀以 × 10 倍的放大倍率拍攝。對於細胞運動視頻片段，同時使用了明場和螢光通道。
鎂基儲氫材料選礦的製備與評價
將鎂（Mg）球（平均直徑20μm）的微粒均勻地分佈在浸有生理鹽水溶液的醫用紗布上。醫用防水透氣聚氨酯薄膜覆蓋在醫用紗布的兩面。然後將「三明治敷料」密封在邊緣，並縫在受傷動物背部的矽膠膜上。對照組使用用生理鹽水浸泡的普通醫用紗布，不含Mg。所有的敷料每天都要更換。H 的發佈2通過頂空氣相色譜法（GC）（Shimadzu，GCMS-QP2010S）測量。
統計分析
為了比較兩組，進行雙尾配對和未配對 Student t 檢驗以計算 P 值並確定統計學顯著差異（顯著性設置為 P < 0.05，詳見圖例）。對於兩組以上的比較，普通的單因素或雙因素方差分析（ANOVA）檢驗之後是適當的多重比較檢驗（詳見圖例）。所有實驗重複兩次，結果相同。所有統計分析均使用GraphPad Prism 8軟體進行。
結果
氫氣大大加速了全層背皮缺損小鼠的皮膚無菌傷口閉合
確定 H2改善傷口癒合，我們使用全層背皮缺損小鼠建立了皮膚無菌傷口模型，這些小鼠每天施用 H2在治療室中（圖 1）。1A）.採樣區域和傷口方案也如圖所示。1安。我們評估了高（66% H2， 66% H2+ 33% O2）和低（5%H2;5% H2+ 21% 氧化物2空氣）濃度的 H2在 11 天的時間過程中傷口癒合（圖 11 天）。1B），包括對照（空氣）和33%O2（33% O2在空氣中）小鼠組進行比較.H2長期以來一直被認為是靶向ROS的抗氧化劑;因此，我們還增加了一個 N-乙醯基-L-半胱氨酸 （NAC） 治療組，以評估 ROS 裂解在傷口癒合中的可能作用。我們的結果表明，66% H2組 （66% H2+ 33% O2）比其他任何一組都癒合得更快。治療后第一天出現肉眼差異，第3天變得更加明顯（圖1）。1C）.受傷11天后，66%H2組的傷口閉合率顯著增加（66% H 的傷口閉合率約為 90%2群;與 5% H 的 70% 閉合相比2組和對照組約30%關閉;無花果。1此外，NAC和33%O的癒合率2組與對照組相似。這些結果表明 H2以劑量依賴性方式促進癒合，並且癒合效果不依賴於 O2或 ROS（圖 1）。1C，D）。
進一步可視化 H 的效果2在傷口癒合方面，我們在第 11 天對蘇木精和伊紅 （H&E） 和馬森染色切片進行了組織學分析（圖 1）。1損傷皮膚組織的定位如示意圖所示（圖1）。1A，右部分）。表皮形成更充分，真皮和表皮交界處（DEJ）在66%H中表現完整，膠原沉積較多2組，而在 NAC 和 33% O 中均觀察到較弱的 DEJ 和部分再上皮化2組。儘管 NAC 在損傷后第 3 天降低 EGF 和 TGF-β1 生長因子水準方面有作用（pbFGF型< 0.01， pTGF-β1型< 0.05）（圖S1）。因此，這些結果驗證了 ROS 裂解和 33% O2單獨給葯能夠促進傷口癒合過程。值得注意的是，66% H 中的傷口癒合模式2組看起來類似於濕癒合，血痂形成較少，組織重塑更好。
作為 66% H 的好處2在第3天可以看到傷口癒合的應用，我們評估了簡化治療是否具有治療價值。對於這些實驗，我們用66%H處理小鼠2僅3天，然後停止給葯，同時繼續監測小鼠6天。如圖所示。1F、G、66%H2組癒合速度快於對照組;然而，所有癒合速度都慢得多，最終傷口閉合率< 50%，第 3-5 天后可見血凝塊。因此，這些結果表明，需要持續的日常治療才能獲得 H 的全部益處2.
氫氣可增加傷口區域的血流量和血氧水準，並促進早期血管形成
作為傷口癒合的重要指標，測試傷口血流量和血氧[54,55]含量，以評估66%H的效果2灌注。從傷口后第5天到影像學檢查的最後一天，傷口床內的血液灌注在66%的H2其他組（P [66% H2vs. 對照] < 0.0001） （圖 1.1H，I），表明更好的組織存活和管形成[56]。此外，氧飽和度（SaO2）、總血紅蛋白質量 （tHb） 和去氧血紅蛋白 （HHb） 值從第 3 天開始均較高，在 66% H2組比在5%H中2和對照組（圖1）。阿拉伯數位I）. H開始血管形成2可能早於受傷后第 5 天。
